小分子干扰RNA沉默高迁移率族蛋白B1抑制肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成*

doi:10.3969/j.issn.1672-5069.2015.04.002

实用肝脏病杂志 ›› 2015, Vol. 18 ›› Issue (4): 340-343.doi: 10.3969/j.issn.1672-5069.2015.04.002

小分子干扰RNA沉默高迁移率族蛋白B1抑制肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成^*

葛文松，范建高，李光明

200092 上海市上海交通大学医学院附属新华医院消化内科

收稿日期:2015-01-14 出版日期:2015-07-10 发布日期:2016-02-19
通讯作者: 李光明，E-mail：ligm68@126.com E-mail:gewensong@126.com
作者简介:葛文松，男，37岁，博士研究生，主治医师。主要从事慢性肝病及炎症性肠病诊治的基础与临床研究。E-mail:gewensong@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（编号：81200279）

Inhibition of small interfering RNA targeting high mobility group box chromosomal protein 1 on collagen type Ⅰand Ⅲ in hepatic stellate cells in vitro

Ge Wensong，Fang Jiangao， Li Guangming

Department of Gastroenterology，Xinhua Hospital，Jiao Tong University School of Medicine，Shanghai 200092，China

Received:2015-01-14 Online:2015-07-10 Published:2016-02-19

摘要/Abstract

摘要： 目的研究小分子干扰RNA（siRNA）干扰高迁移率族蛋白B1（HMGB 1）表达对肝星状细胞（HSC） Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达的影响。方法将化学合成的HMGB 1基因特异性siRNA以脂质体包裹，转染HSC-T6细胞，设阴性对照和空白对照，抽提细胞总RNA和蛋白质，采用Western blot法检测细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达情况；采用细胞免疫荧光法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达与定位；采用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原水平。结果转染HMGB 1基因特异性siRNA的HSC-T6细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白水平显著下调，免疫细胞化学检测也提示转染siRNA 后细胞内Ⅰ型和Ⅲ型胶原水平较对照组明显降低；在培养72 h时，上清液Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原水平分别较对照组下降了（46.36±3.82） %和（41.92±3.58） %（F=33.14，P<0.01；F=27.56，P<0.01）。结论 HMGB 1特异性siRNA能高效抑制HSC-T6细胞胶原的合成和分泌，因而可能具有预防和治疗肝纤维化的潜力。

关键词: 肝星状细胞, 小分子干扰RNA, 高迁移率族蛋白B1, 胶原

Abstract: Objective To investigate the effects of synthetic small interfering RNA（siRNA） targeting high mobility group box chromosomal protein 1（HMGB1-siRNA） on collagen type Ⅰand Ⅲ in hepatic stellate cells （HSCs） in vitro. Methods Synthetic siRNA targeting HMGB1 was transfected into HSC-T6 cells by lipofectamine， and negative siRNA transfection and no transfection were used as negative control and blank control， respectively. After incubation with siRNA，total RNA and protein of HSC-T6 cells were extracted；the protein levels of typeⅠand Ⅲ collagen were determined by using Western blotting and immunofluorescence；Collagen type Ⅰand Ⅲ levels in the supernatants were determined by enzyme linked immunosorbent assay. Results The expression of collagen type Ⅰ and Ⅲ were significantly reduced after transfection of HMGB1-siRNA compared with in control or blank. The levels of collagen type I and type Ⅲ in the supernatants of transfected cells were decreased than in the negative control at 72 hours；the 1evels of type I collagen decreased by（46.36±3.82）% （F=33.14，P<0.01） and the 1evel of type Ⅲ collagen decreased by（41.92±3.58）%（F=27.56，P<0.01） at 72 hours when compared to the control. Conclusion Inhibition of HMGB1 by siRNA decreases the synthesis and the secretions of typeⅠ and Ⅲ collagen in HSCs and this might has a potential effect in prevention and treatment of hepatic fibrosis.

Key words: Hepatic stellate cells, Small interfering RNA, High mobility group box chromosomal protein 1, Collagen

葛文松，范建高，李光明. 小分子干扰RNA沉默高迁移率族蛋白B1抑制肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成^*[J]. 实用肝脏病杂志, 2015, 18(4): 340-343.

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小分子干扰RNA沉默高迁移率族蛋白B1抑制肝星状细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成^*

Inhibition of small interfering RNA targeting high mobility group box chromosomal protein 1 on collagen type Ⅰand Ⅲ in hepatic stellate cells in vitro

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