新型异喹啉类化合物12-4-Y对活化肝星状细胞凋亡的影响及其机制研究*

doi:10.3969/j.issn.1672-5069.2015.04.003

实用肝脏病杂志 ›› 2015, Vol. 18 ›› Issue (4): 344-347.doi: 10.3969/j.issn.1672-5069.2015.04.003

新型异喹啉类化合物12-4-Y对活化肝星状细胞凋亡的影响及其机制研究^*

王军，李光明，仝艳艳，邓怡林，吴劼，范建高

200092 上海市上海交通大学医学院附属新华医院消化内科（王军，李光明，范建高，仝艳艳，邓怡林）；复旦大学化学系（吴劼）

收稿日期:2014-12-02 出版日期:2015-07-10 发布日期:2016-02-19
通讯作者: 李光明，E-mail: ligm68@126.com E-mail:nalanxuehai@126.com
作者简介:王军，女，26，硕士研究生。主要从事肝损伤及肝纤维化的防治研究，E-mail: nalanxuehai@126.com
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（81070344）；中国肝炎基金会王宝恩肝纤维化研究基金资助项目（200090007）

Mechanism of 12-4-Y，a novel isoquinoline compound， on apoptosis of activated hepatic stellate cells in vitro

Wang Jun，Li Guangming，Tong Yanyan，et al.

Department of Gastroenterology，Xinhua Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai 200092，China

Received:2014-12-02 Online:2015-07-10 Published:2016-02-19

摘要/Abstract

摘要： 目的探讨新型异喹啉类化合物12-4-Y[1-乙基-8-甲氧基-5苯基吡唑并（5，1-a）异喹啉]对大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响，并探讨其可能的机制。方法以不同浓度（5、10、20、40和80 μg/ml） 12-4-Y处理HSC-T6细胞，分别于孵育后12h、24h、36h和48h收集细胞，以MTT法检测细胞增殖，以Hoechst染色对凋亡定性，以流式细胞分析对凋亡定量，应用Western blot检测凋亡关键蛋白Caspase3表达变化。结果 12-4-Y处理12h可浓度依赖性（在5～80 μg/ml范围内）抑制HSC-T6细胞增殖，细胞增殖率分别为（1.086±0.013）、（1.055±0.019）、（0.957±0.012）、（0.793±0.021）和（0.553±0.031），均显著高于对照组水平（1.215±0.014，P<0.05）；12-4-Y（20μg/ml）处理可时间依赖性抑制HSC-T6细胞增殖，在12 h、24 h、36 h、48 h，细胞增殖率分别为（0.957±0.012）、（0.852±0.024）、（0.641±0.032）和（0.492±0.017），与对照组（1.318±0.007，P<0.01）差异具有显著性；12-4-Y（20μg/ml）处理24h时，Hoechst染色显示HSC-T6可见明显凋亡小体，流式细胞分析显示凋亡率为（29.23±1.20）%，显著高于对照组[（5.47±1.39）%，P<0.001]；蛋白质印迹显示凋亡关键蛋白Caspase3的裂解产物表达亦显著增加。结论新型异喹啉类化合物12-4-Y可显著诱导活化HSC凋亡，其机制与激活凋亡关键蛋白Caspase3有关。

关键词: 肝星状细胞, 异喹啉类化合物, 凋亡, 凋亡小体

Abstract: Objective To study the mechanism of 12-4-Y[1-ethyl -8- methoxy -5 phenyl pyrazole （5，1-a） isoquinoline]，a novel isoquinoline compound， on apoptosis of activated rat hepatic stellate cells （HSCs） in vitro. Methods HSCs-T6 cells were treated with 12-4-Y at different concentrations（5，10，20，40 and 80 μg/ml） for 12 h，24 h，36 h and 48 h，respectively. Cell proliferation was determined by MTT assay. Qualitative and quantitative cell apoptosis were measured by Hoechst staining and flow cytometry（FCM），respectively. The expression of caspase 3 and its active form were detected by Western blotting. Results The proliferation rates of HSC-T6 cells when incubated with 12-4-Y for 12 hours were dose-dependent decreased[（1.086±0.013），（1.055±0.019），（0.957±0.012），（0.793±0.021） and（0.553±0.031），significantly lower than that in control group （1.215±0.014），P<0.05 for all]； the time-dependent inhibition of cell proliferation was observed when the incubation concentration of 12-4-Y at dose of 20 μg/ml was fixed[（0.957±0.012），（0.852±0.024），（0.641±0.032） and （0.492±0.017） at 12 h，24 h，36 h and 48h，significantly lower than that in the control group（1.318±0.007），P<0.01 for all]；In cells treated with 20 μg/ml for 24h，the apoptotic rate revealed by flow cytometry analysis was （29.23±1.20）%，which was significantly higher than that in the control group[（5.47±1.39）%，P<0.001] and Hoechst staining showed obvious apoptotic bodies in HSCs-T6 cells，in addition，Western blotting analysis revealed increased expression of cleaved caspase3 compared with in the control group. Conclusion 12-4-Y has great potential in inducing HSCs apoptosis and the activation of caspase3 might be involved in this process.

Key words: Hepatic stellate cells, Isoquinoline compound, Apoptosis, Apoptosis body

王军，李光明，仝艳艳，邓怡林，吴劼，范建高. 新型异喹啉类化合物12-4-Y对活化肝星状细胞凋亡的影响及其机制研究^*[J]. 实用肝脏病杂志, 2015, 18(4): 344-347.

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新型异喹啉类化合物12-4-Y对活化肝星状细胞凋亡的影响及其机制研究^*

Mechanism of 12-4-Y，a novel isoquinoline compound， on apoptosis of activated hepatic stellate cells in vitro

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