大鼠肝星状细胞CTGF、纤维连接蛋白和整合素的表达变化及肝复康的调节作用*

doi:10.3969/j.issn.1672-5069.2017.02.007

摘要/Abstract

摘要： 目的观察乙醛激活的大鼠肝星状细胞（HSCs）结缔组织生长因子（CTGF）、纤维连接蛋白（FN）和整合素的表达变化，以及中药肝复康对它们表达的影响。方法制备肝复康含药血清，体外培养HSC-T6细胞，用乙醛及肝复康含药血清干预HSCs，采用RT-PCR法检测HSCs中CTGF、FN、整合素α5、整合素β1和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA的相对光密度值。结果乙醛刺激后HSC-T6细胞CTGF、FN、整合素α5、整合素β1和α-SMA mRNA水平分别为（1.06±0.02）、（1.28±0.23）、（2.13±0.09）、（1.57±0.50）和（2.84±0.14），与空白对照组细胞[分别为（0.46±0.05）、（0.40±0.09）、（0.37±0.10）、（0.19±0.03）和（0.18±0.03）]相比，均显著升高（P＜0.01），而肝复康干预能显著降低它们的水平[分别为（0.59±0.02）、（0.71±0.15）、（1.55±0.04）、（0.92±0.22）和（1.99±0.10），P＜0.01]。结论肝复康干预HSCs活化可能与抑制CTGF、FN、整合素α5、整合素β1和α-SMA水平有关。

关键词: 肝星状细胞, 肝康复, 结缔组织生长因子, 纤维连接蛋白, 整合素, 体外

Abstract: Objective To observe the changes of connective tissue growth factor （CTGF），fibronectin （FN），and integrin mRNA levels in a herbal medicine-intervened HSC-T6 cells in vitro.Methods Sera containing Gan-fu-kang，a herbal medicine compound，was prepared from rats. HSC-T6 cells were cultured in vitro，and the HSCs activated by acetaldehyde were incubated with sera containing Gan-fu-kang. RT-PCR was used to detect the mRNA of CTGF，FN，integrin-α5，integrin-β1 and α-smooth muscle actin （α-SMA）. Result The mRNA levels of CTGF，FN，integrin-α5，integrin-β1，and α-SMA in the HSCs stimulated by acetaldehyde were（1.06±0.02），（1.28±0.23），（2.13±0.09）（1.57±0.50） and（2.84±0.14），respectively，significantly higher than those in the control cells [（0.46±0.05），（0.40±0.09），（0.37±0.10），（0.19±0.03） and （0.18±0.03），P＜0.01]，and they were down-regulated after incubated with sera containing Gan-fu-kang [（0.59±0.02），（0.71±0.15），（1.55±0.04），（0.92±0.22） and（1.99±0.10），respectively，P＜0.01].Conclusion The effect of Gan-fu-kang is related to the inhibition of CTGF，FN，integrin α5， integrin-β1 and α-SMA in activated HSCs.

Key words: Hepatic stellate cells, Gan-fu-kang, herbal medicine, Connective tissue growth factor, Fibronectin, Integrin, In vitro

张坤，胡海，张圆，刘佳. 大鼠肝星状细胞CTGF、纤维连接蛋白和整合素的表达变化及肝复康的调节作用*[J]. 实用肝脏病杂志, 2017, 20(2): 153-156.

Zhang Kun，Hu Hai，Zhang Yuan，et al.. Changes of CTGF，fibronectin and integrin mRNA levels in Gan-fu-kang，a herbal medicine-intervened rat hepatic stellate cells in vitro[J]. JOURNAL OF PRACTICAL HEPATOLOGY, 2017, 20(2): 153-156.

参考文献

[1] Wynn TA. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. J Pathol，2008，214（2）:199-210.
[2] Kitano M，Bloomston PM. Hepatic stellate cells and microRNAs in pathogenesis of liver fibrosis. J Clin Med，2016，5（3）:38.
[3] Lipson KE，Wong C，Teng Y，et al. CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis. Fibrogen Tiss Rep，2012，5（Suppl 1）:S24.
[4] Zhang K，Jiang MN，Zhang CH，et al. Effects of Ganfukang on expression of connective tissue growth factor and focal adhesion kinase/protein kinase B signal pathway in hepatic fibrosis rats. Chin J Integr Med，2014，20（6）:438-444.
[5] 张坤，姜妙娜，张彩华，等. 肝复康对肝纤维化大鼠肝组织整合素α5β1/FAK信号通路的调节作用. 实用肝脏病杂志，2012，15（2）：104-107.
[6] Tong M，Wang Y，Wang Y，et al. Genistein attenuates advanced glycation end product-induced expression of fibronectin and connective tissue growth factor. Am J Nephrol，2012，36（1）:34-40.
[7] Mòdol T，Brice N，Ruiz de Galarreta M，et al. Fibronectin peptides as potential regulators of hepatic fibrosis through apoptosis of hepatic stellate cells. J Cell Physiol，2015，230（3）:546-553.
[8] Xu TT，Jiang MN，Li C. Effect of Chinese traditional compound， Gan-fu-kang，on CCl4-induced liver brosis in rats and its probable molecular mechanisms. Hepatol Res，2007，37（3）:221-229.
[9] Lou JL，Jiang MN，Li C，et al. Herb medicine Gan-fu-kang attenuates liver injuryin a rat brotic model. J Ethnopharmacol，2010，128（1）:131-138.
[10] 张彩华，姜妙娜，李骢，等. 肝复康药物血清对肝星状细胞核因子-κB及I、Ⅲ型胶原表达的影响. 中西医结合肝病杂志，2012，22（2）：100-103.
[11] 张坤，姜妙娜，张彩华，等. 中药肝复康对肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的干预作用. 实用肝脏病杂志，2012，15（1）：34-36.
[12] Puche JE，Saiman Y，Friedman SL. Hepatic stellate cells and liver fibrosis. Compr Physiol，2013，3（4）:1473-1492.
[13] Chen YH，Lan T，Li J，et al. Gardenia jasminoides attenuates hepatocellular injury and fibrosis in bile duct-ligated rats and human hepatic stellate cells. World J Gastroenterol. 2012，18（48）:7158-7165.
[14] Ponticos M. Connective tissue growth factor（CCN2） in blood vessels. Vascul Pharmacol，2013，58（3）:189-193.
[15] Kubota S，Takigawa M. Cellular and molecular actions of CCN2/CTGF and its role under physiological and pathological conditions. Clin Sci （Lond），2015，128（3）:181-196.
[16] Wells JE，Howlett M，Cole CH，et al. Deregulated expression of connective tissue growth factor （CTGF/CCN2） is linked to poor outcome in human cancer. Int J Cancer，2015，137（3）:504-511.
[17] 贾玉杰. 结缔组织生长因子与肝纤维化关系的研究进展. 大连医科大学学报，2014，36（2）：103-109.
[18] Holbourn HP，Acharya KR，Perbal B. The CCN family of proteins:structure-function relationships. Trend Biochem Sci，2008，33（10）:461-473.
[19] Mui KL，Chen CS，Assoian RK. The mechanical regulation of integrin-C adherin crosstalk organizes cells，signaling and forces. J Cell Sci，2016，129（6）:1093-1100.
[20] Reed NI，Jo H，Chen C，et al. The αvβ1 integrin plays a critical in vivo role in tissue fibrosis. Sci Transl Med，2015，7（288）:79.