目的 探讨双特异性蛋白磷酸酶10(DUSP10)通过调控肝癌细胞干性特征介导对仑伐替尼耐药的作用机制。方法 构建Huh7-Resistant和Hep3B-Resistant仑伐替尼耐药细胞系,建立稳定过表达DUSP10的Huh7和PLC/PRF/5细胞及敲减DUSP10的Huh7-Resistant、Hep3B-Resistant和Hep-12细胞模型。采用Western blot法检测干性标志物(Nanog、BMI1和ABCG2)表达,采用CCK8法测定IC50值并计算耐药指数(RI)。结果 耐药细胞系DUSP10表达量较野生型上调2.1～3.8倍(P<0.01);DUSP10过表达使Huh7和PLC/PRF/5细胞对仑伐替尼IC50分别从1.376 μM升至28.44 μM(RI=20.67)和4.118 μM升至18.01 μM(RI=4.37),干性基因表达上调1.5～2.3倍;敲减DUSP10使Huh7-Resistant、Hep3B-Resistant和Hep-12细胞的IC50分别降低6.53倍、12.02倍和3.29倍(均P<0.001),干性基因表达下调约40%～60%。结论 DUSP10通过上调Nanog/BMI1/ABCG2等干性基因表达显著降低肝癌细胞对仑伐替尼的敏感性,靶向干预DUSP10-干性通路可能逆转癌细胞耐药。

目的 探究外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP2)和Zeste增强子同源物2(EZH2)在乙型肝炎病毒(HBV)阳性肝癌细胞的促肿瘤作用。方法 合成针对ENPP2和EZH2的siRNA,以敲除HepG2细胞和稳定转染HBV基因组的HepG2.2.15细胞两种蛋白表达。分别取HepG2、HepG2.2.15、转染pSM2质粒的HepG2细胞(HepG2/pSM2)、转染siENPP2或siEZH2的HepG2.2.15细胞,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞ENPP2和EZH2 mRNA水平及其蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,采用Trans-well试验检测肝癌细胞侵袭能力。结果 与HepG2细胞比,瞬时转染HBV表达质粒的HepG2和稳定转染HBV基因组的HepG2.2.15细胞ENPP2和EZH2 mRNA水平都显著升高(P<0.001),转染HBV的肝癌细胞ENPP2和EZH2蛋白表达也明显上调(P<0.001);HepG2.2.15细胞增殖和侵袭能力显著强于HepG2细胞(P<0.01),而抑制ENPP2或EZH2表达的HepG2.2.15细胞增殖和侵袭能力也明显减弱(P<0.01)。结论 HBV阳性肝癌细胞促肿瘤因子ENPP2和EZH2表达增强,细胞的增殖和侵袭力也增强,可能与肝癌发生有关。

目的 探讨二乙基二硫代氨基甲酸(DDC)通过调控Insr/Akt信号通路改善代谢相关脂肪性肝炎(MASH)的分子机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组、MASH组和DDC干预组,每组6只。采用胆碱缺乏、L-氨基酸替代蛋白(CDAA)饲料喂养建立MASH模型或在造模同时给予DDC灌胃干预。采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测肝组织胰岛素受体(Insr)和促凋亡分子Bax表达。采用棕榈酸(PA)诱导建立小鼠AML12细胞脂毒性模型,同时给予DDC干预。采用蛋白免疫印迹法检测AML12细胞Insr、Akt、pAkt、Bcl2和Bax蛋白表达。结果 MASH组小鼠肝组织Insr基因水平为(0.38±0.13),较对照组显著降低[(1.03±0.27),P<0.05];MASH组小鼠肝组织Insr蛋白表达水平为(0.61±0.11),较对照组显著降低[(1.68±0.58),P<0.05],而DDC干预组小鼠肝组织Insr蛋白表达水平为(1.03±0.11),较MASH组显著升高(P<0.05);MASH组小鼠肝组织Bax蛋白表达水平为(1.14±0.39),较对照组显著增强[(0.47±0.26),P<0.05],而DDC干预组小鼠肝组织Bax蛋白表达水平为(0.66±0.19),较MASH组显著降低(P<0.05);PA组AML12细胞Insr蛋白表达水平为(0.38±0.13),较对照组显著降低[(0.74±0.21),P<0.05],而DDC干预组AML12细胞Insr蛋白表达水平为(0.71±0.20),较PA组显著升高(P<0.05);PA组AML12细胞pAkt与Akt蛋白表达水平比值为(0.28±0.07),较对照组显著降低[(0.69±0.06),P<0.05];25 μM或50 μM DDC干预组AML12细胞pAkt与Akt蛋白表达水平比值分别为(0.85±0.02)和(0.97±0.04),较PA组显著升高(P<0.05); PA组AML12细胞Bcl2与Bax蛋白表达水平比值为(1.28±0.29),较对照组显著降低[(1.74±0.10),P<0.05],而DDC干预组AML12细胞Bcl2与Bax蛋白表达水平比值为(2.30±0.78),比PA组显著升高(P<0.05)。结论 CDAA饮食诱导的MASH小鼠肝组织Insr/Akt通路被抑制,细胞凋亡增加。DDC可能通过上调MASH小鼠肝组织Insr/Akt信号通路,抑制肝细胞凋亡,进而改善MASH。