慢性乙型肝炎病毒感染者HBcAg特异性细胞毒性T细胞克隆的建立

doi:10.3969/j.issn.1672-5069.2010.02.002

实用肝脏病杂志 ›› 2010, Vol. 13 ›› Issue (2): 85-88.doi: 10.3969/j.issn.1672-5069.2010.02.002

慢性乙型肝炎病毒感染者HBcAg特异性细胞毒性T细胞克隆的建立

何长伦, 王寿明, 郑纪山, 张益红, 唐雨德

210002 南京市解放军第81医院全军肝病中心（何长伦,王寿明）; 南京军区军事医学研究所（郑纪山,唐雨德）; 南京市红十字血液中心（张益红）

收稿日期:2009-09-14 出版日期:2010-04-10 发布日期:2016-04-18
通讯作者: 郑纪山,E-mail：zhengjishannj@yahoo.com.cn
作者简介:何长伦男,56岁,医学硕士,主任医师。主要从事肝脏疾病的临床与基础研究。E-mail：hjqaz@sina.com
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（编号：30671929）

Establishment and analysis of HBcAg-specific CTL clones in a patient with chronic hepatitis B

HE Changlun, WANG Shouming, ZHENG Jishan, et al.

Institute of Liver Diseases,81st Hospital of PLA,Nanjing 210002,China

Received:2009-09-14 Online:2010-04-10 Published:2016-04-18

摘要/Abstract

摘要： 目的建立HLA-A*2402限制的HBcAg特异性CTL细胞克隆。方法取HLA-A*2402阳性的慢性HBV感染者的PBMC,用限制性表位肽（HBV core117-125,EYLVSFGVW）和重组HBcAg刺激,并以有限稀释法对活化的T细胞进行克隆化,用免疫荧光染色、流式细胞术以及乳酸脱氢酶释放实验对所获克隆进行鉴定。结果 PBMC经表位肽激活后,特异性细胞毒活性达到43.7%;从活化细胞获得11株T细胞克隆;除2株是CD4⁺T细胞克隆外,其余9株为CD8⁺T细胞克隆,其中2株为Tc1,3株为Tc2和4株为Tc0。9株CD8⁺T克隆在效/靶比例为2.5：1时均具有HBcAg特异性靶细胞溶解活性（33.9%~90.2%）。结论用HBVcore117-125能激活HLA-A*2402阳性的慢性HBV感染者外周血CD8⁺T细胞,随之建立的9株CD8⁺T克隆均具有HBcAg表位特异性细胞毒活性。

关键词: 慢性乙型肝炎, 细胞毒T细胞, 细胞克隆, 表位

Abstract: Objective To establish HLA-A*2402 restricted HBV core antigen（HBcAg）-specific CTL clones. Methods PBMC obtained from a patient with chronic hepatitis B with HLA-A*2402 molecule positive were stimulated by using synthetic peptides（HBc117-125,EYLVSFGVW） and rHBcAg,and T cell clones subsequently were established by limiting dilution technique. T cell clones were then characterized by immunofluorescence staining,flow cytometry analysis and LDH release. Results After 3wk of in vitro stimulation,PBMC from the patient displayed peptide-specific cytolytic activity（43.7%,E/T ratio=60：1）;Eleven HBV-specific T cell clones were established from these activating PBMC by limiting dilution technique;Nine of these clones were CD8⁺T clones,and the other two were CD4⁺T clones;The nine CD8⁺T cell clones,including 2 Tc1,3 Tc2 and 4 Tc0,displayed peptide-specific cytolytic activity（33.9% to 90.2%,E/T ratio=2.5：1）. Conclusion HBc117-125 is capable of inducing Ag-specific cytotoxic T cells in PBMC of HLA-A*2402 positive patient with chronic hepatitis B. The Nine CD8⁺T cell clones display HBcAg epitope-specific cytolytic activity.

Key words: Hepatitis B, Cytotoxic T lymphocyte, Cell cloning, Epitope

何长伦, 王寿明, 郑纪山, 张益红, 唐雨德. 慢性乙型肝炎病毒感染者HBcAg特异性细胞毒性T细胞克隆的建立[J]. 实用肝脏病杂志, 2010, 13(2): 85-88.

HE Changlun, WANG Shouming, ZHENG Jishan, et al.. Establishment and analysis of HBcAg-specific CTL clones in a patient with chronic hepatitis B[J]. JOURNAL OF PRACTICAL HEPATOLOGY, 2010, 13(2): 85-88.

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